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高GC纳米PCR试剂盒
产品目录号：NHS21-5
高GC纳米PCR试剂盒产品说明：本试剂盒既适用于高GC序列的扩增，也适用于一般PCR扩增。产品定位于解决目前市场上难于扩增的若干PCR反应。纳米PCR是纳米材料辅助的基因扩增技术,研究表明某些纳米材料可以增强基因扩增的总体效率。
高GC纳米PCR试剂盒25ul/250次 配置如下：
2×NanoPCR buffer 11-1 (1000ul)；
2×NanoPCR buffer 11-2 (1000ul)；
2×NanoPCR buffer 11-3 (1000ul)；
dNTPs (2.5mM)(300ul)；
MgCl2 (25 mM) (500ul)；
Taq DNA polymerase (5 U/ul) (60ul)
使用建议:
- 纳米材料容易聚集，每次使用前请震荡均匀再使用。PCR产物中含有的纳米材料一般不影响电泳等后续操作。
- 一个典型的PCR反应（举例：扩增一个高GC片段780bp）设计如下：
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12ul反应 |
25ul反应 |
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2×NanoPCR buffer-11 |
6.0 ul |
12.0ul |
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dNTPs (2.5 mM) |
1.0 ul |
2.0ul |
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MgCl2 (25 mM) |
1.2 ul |
2.5ul |
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Primer 1(2 uM) |
0.8 ul |
1.6ul |
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Primer 2(2 uM) |
0.8 ul |
1.6ul |
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Template DNA (~10 ng/ul) |
0.2 ul |
0.4ul |
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Taq DNA polymerase (5 U/ul) |
0.2 ul |
0.4ul |
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ddH2O |
1.8 ul |
4.5ul |
PCR程序举例：[94℃-5min]；[94℃-30s，56℃-30s，72℃-40s]×35 cycles（循环数可按照PCR产物的多少适当调节）；[72℃-5min]. 如果不确定zui佳退火温度，可以先做梯度PCR确定zui佳退火温度。
- 批量PCR需要计算并规划好实验中所需要混合的mix总量以及需要单独加入PCR体系中的成分和加量。例：做以不同基因组为模板的9管12ul体系的PCR。计入加样损耗，按10管加量计算。试验操作全过程建议在冰盒上进行。
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12ul反应 |
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2×NanoPCR buffer-11 |
6.0 ul |
×10=60 |
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dNTPs (2.5 mM) |
1.0 ul |
×10=6 |
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MgCl2 (25 mM) |
1.2 ul |
×10=12 |
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Primer 1(2 uM) |
0.8 ul |
×10=8 |
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Primer 2(2 uM) |
0.8 ul |
×10=8 |
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Template DNA (~10 ng/ul) |
0.2 ul |
单独添加 |
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Taq DNA polymerase (5 U/ul) |
0.2 ul |
×10=2 |
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ddH2O |
1.8 ul |
×10=18 |
按照上表所描述的将mix做好，并反复摇晃15-20下、上下振荡后离心（大约待离心机转到7000rpm随即停下来就好），离心后，用枪头分别加入相应基因组0.2ul的PCR管内，每管11.8ul并用枪头顺便混合3下使均匀。放入PCR仪进行PCR。
实验举例1：扩增以人类基因组为模板的38对序列引物。该38对高GC扩增产物GC>60%,大小均在700-800bp左右。38对退火温度基本一致。使用上述12ul扩增体系， 使用NanoPCR试剂盒进行扩增的图片如图1所示。
图1 使用NanoPCR试剂盒扩增人类基因组38对引物的电泳图片
Marker为λ/Hind Ⅲ.
图2 使用国外某公司高GC试剂盒扩增人类基因组38对引物的电泳图片
图3 使用国内某公司高GC试剂盒扩增人类基因组38对引物的电泳图片
参考文献：
Haikuo Li etal. Nanoparticle PCR: Nanogold-assisted PCR with enhanced specificity. Angew. Chem. Int. Ed. 2005, 44(32):5100-3
Zhizhou Zhang et al. Aqueous suspension of carbon nanopowder enhances the efficiency of polymerase chain reaction. Nanotechnology, 18 (2007) 355706
Zhizhou Zhang et al. Aqueous suspension of carbon nanotubes enhances the efficiency of long PCR. 2008, Biotechniques, 44(4):537-545
保存温度：-20℃
保质期：12个月
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户实生物经过不断的实验优化和改进，积累了大量的经验，拥有专业的户实研发团队。利用专业的户实免疫技术自主研发的elisa试剂盒，能对血清及其它样本定量检测抗原，定性检测特异性抗体。优质的试剂，先进的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。ELISA检测的方便性、稳定性、重复性和可靠性方面都具有很大的优势。
ELISA检测技术服务内容：
1、双抗体夹心法检测抗原
2、间接法检测抗体
3、为客户提供各种ELISA技术进行样本检测。
二、样本要求
在收集标本前都必须有一个完整的计划，必须清楚要检测的成份是否足够稳定。我们提倡新鲜标本尽早检测，对收集后当天就进行检测的标本，及时储存在4℃备用，如有特殊原因需要周期收集标本，请造模取材后，将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。因冰室与室温存在一定温差，蛋白极易降解，直接影响实验质量，所以避免反复冻融。代测放免标本的客户取材前须向我司销售人员索要说明书，具体操作注意事项请与我司技术人员沟通。
液体类标本：标本必须为液体，不含沉淀。包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。
血清：室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。
血浆：应根据试剂盒的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，加入10%（v/v）抗凝剂(0.1M柠檬酸钠或1%heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。
尿液、胸腹水、脑脊液：用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。
细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.0-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，缓冲液中可加入1μg/L蛋白酶抑制剂或50U/ml的Aprotinin（抑肽酶）。用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清置于-20度或-70度保存，如有必要，可以将样品浓缩干燥。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
三、寄标本时需注明以下情况：
1、标本编号；2、所测项目；3、是否做复孔；3、联系方式；4、实验后标本是否寄回。
客户须知：
客户应对所提供的材料及信息负责，如因客户提供的材料及信息不准确而引起的实验延误或经济损失由客户承担。
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