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产品名称：纳米长PCR试剂盒
产品目录号：NHS21-1
产品说明：本试剂盒适用于长PCR扩增（≦20kb）。产品定位于解决目前市场上难于扩增的若干PCR反应。纳米PCR是纳米材料辅助的基因扩增技术,研究表明某些纳米材料可以增强基因扩增的总效率。
纳米长PCR试剂盒25ul/100次 配置如下：
4×NanoPCR buffer 1 (800ul，已包含dNTPs和Mg2+)；
4×NanoPCR buffer 2 (800ul，已包含dNTPs和Mg2+)；
4×NanoPCR buffer 3 (800ul，已包含dNTPs和Mg2+)；
MgCl2 (25 mM) (500ul)；
LPCR enzyme Mix (5 U/ul) (40ul)
纳米长PCR试剂盒使用建议：
- 本试剂盒配备了三种PCR buffer，建议同时尝试三种buffer，一开始不用额外添加MgCl2。选择zui适合的引物和buffer进行后续试验操作。纳米材料容易团聚，每次使用前请轻轻摇匀后使用。PCR产物中含有的纳米材料一般不影响电泳等后续操作。
- PCR反应体系中各参数加量参考如下：
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试剂 |
一般终浓度 |
建议用量 |
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50ul |
25ul |
12ul |
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Sterilized ddH2O |
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补齐50ul |
补齐25ul |
补齐12ul |
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4×PCR buffer |
1× |
12.5ul |
6.25ul |
3.0ul |
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Primer 1(2 uM) |
0.1~1uM |
6.0ul |
3.8ul |
1.9ul |
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Primer 2(2 uM) |
0.1~1uM |
6.0ul |
3.8ul |
1.9ul |
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Template DNA (0.1ug/ul) |
10pg~1ug |
1.0ul |
0.4ul |
0.2ul |
|
LPCR enzyme Mix (5 U/ul) |
1~3U/50ul |
0.6ul |
0.4ul |
0.2ul |
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MgCl2(25mM) |
可根据情况自行确定添加量，一般不用即可 |
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建议使用2步法扩增长PCR。一个典型的长PCR反应程序（举例：从Lambda DNA扩增一个12-18kb的DNA片断）如下：[92℃-2min]；[92℃-20s，65℃-6min]×30 cycles；[72℃-10min]（循环数可按照PCR产物的多少适当调节）. 如果不确定zui佳退火/延伸温度，可以先做梯度PCR确定zui佳退火/延伸温度[65-69℃]。退火/延伸时间可以依据目标长度来调节，一般在2-10分钟。
- 批量PCR需要计算好实验中所需要的mix总量以及需要单独加入PCR体系中的成分和量。例：做以不同基因组为模板的9管12ul体系的PCR。计入加样损耗，按10管加量计算。试验操作全过程建议在冰盒上进行。
将mix做好，上下反复震荡15-20下后再涡旋震荡5秒，离心（大约待离心机转到7000rpm停下）。向每个PCR管加入mix并用枪头混合3下使均匀。放入PCR仪进行扩增。比较容易出现的问题是mix混合不均匀。
参考文献：
Haikuo Li et al. Nanoparticle PCR: Nanogold-assisted PCR with enhanced specificity. Angew. Chem. Int. Ed. 2005, 44(32):5100-3
Zhizhou Zhang et al. Aqueous suspension of carbon nanopowder enhances the efficiency of polymerase chain reaction. Nanotechnology, 18 (2007) 355706
Zhizhou Zhang et al. Aqueous suspension of carbon nanotubes enhances the efficiency of long PCR. 2008, Biotechniques, 44(4):537-545
保存温度：-20℃
保质期：12个月
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纳米长PCR试剂盒：纳米材料与DNA结合的若干基础研究国外做得比较多，目前利用纳米材料的独特的催化性能或与诸多分子（蛋白质、核酸，有机小分子等）的结合性能国内外正在开展大量的应用技术研究，国内的若干研究室已经做出了出色的工作。但是纳米材料能够在一般基因扩增技术无能为力或效率不高的情况下扩增出来目的DNA，并且明显增加了扩增专一性和灵敏度，是在国际上首次发现。目前我们是纳米基因扩增技术研究的ling先者之一。由于基因扩增技术属于上百个DNA技术中的主要技术环节，一旦它具备了把绝大部分现行PCR技术升级换代的优势，它将进入核酸试剂巨大的国际市场，应用价值相当可观。通过本研究我们应该比较清楚纳米材料催化基因扩增的若干机制，极有可能在此基础上研制出更好的基因操作技术。
我们在研究纳米PCR机制的基础上，重点加强纳米基因扩增技术在完整基因扩增中的应用，使用上述三个指标(特异性、灵敏度以及稳定性)来衡量纳米基因扩增技术以及它与其他分子生物学技术相结合的组合技术，能否解决不同长度的基因组完整基因序列在扩增时同样面临的这三个问题。我们还将直接使用血液和尿液作为基因组DNA的存在条件来考察纳米PCR与一般PCR在上述指标上的比较研究。 另外，由于基因组技术(不是一般意义上的基因技术)越来越重要,研究基因时不能像以前一般主要注意基因所转录出来的mRNA或mRNA对应的cDNA了,包含基因内所有调控等信息的DNA 片段越来越多地被研究，它们需要在一起被扩增,即完整基因的扩增将愈发重要。当然基因间的非编码区序列被认为甚至更重要,它们也越来越多地需要被扩增出来加以研究. 初步研究表明纳米基因扩增技术在扩增10-15kb长度的长片段DNA时比一般PCR技术有明显优势。我们正在设计人类基因组第21号染色体上全部基因（533个）的对比扩增实验，先扩增几十个基因，从统计上确立纳米基因扩增在基因组中完整基因大规模扩增的技术优势；在上述研究基础上建立初步通用的完整基因扩增方案。通过上述研究，希望纳米基因扩增技术能够成为解决生物医学研究和应用领域中基因扩增之特异性、高灵敏度和稳定性（或三个指标之一）等重大问题的关键技术。
基因扩增技术发明了二十多年，直到2004年过期，其技术水平也没有达到对扩增结果的可预测程度。但是PCR技术体系并不能被认为是很复杂的反应体系，至少其组成就是DNA模板、引物、聚合酶、dNTPs及缓冲系统，不能算是很复杂的体系。 我们认为应该可以实现扩增结果的可预测性。目前的PCR引物设计软件已经比较成熟。我们选取PRIMER3.1 进行设计，利用TAQ酶和PFU酶系统一次扩增一批序列，把实验结果分为一次扩增成功和一次扩增失败。国内外每天应用PCR技术的实验室何止成千上万，如果PCR技术可以预测结果，将节约大量实验成本并开辟一个巨大的市场。
纳米PCR产品可以作为现有市场PCR产品的有利补充，广大的PCR试剂使用者手上将陆续又多出一批增加基因扩增成功率的好帮手。今后几年内研制出来一批既有自主知识产权又有实用价值的纳米PCR试剂盒，推动纳米生物技术的应用发展。
户实生物经过不断的实验优化和改进，积累了大量的经验，拥有专业的户实研发团队。利用专业的户实免疫技术自主研发的elisa试剂盒，能对血清及其它样本定量检测抗原，定性检测特异性抗体。优质的试剂，先进的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。ELISA检测的方便性、稳定性、重复性和可靠性方面都具有很大的优势。
ELISA检测技术服务内容：
1、双抗体夹心法检测抗原
2、间接法检测抗体
3、为客户提供各种ELISA技术进行样本检测。
二、样本要求
在收集标本前都必须有一个完整的计划，必须清楚要检测的成份是否足够稳定。我们提倡新鲜标本尽早检测，对收集后当天就进行检测的标本，及时储存在4℃备用，如有特殊原因需要周期收集标本，请造模取材后，将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。因冰室与室温存在一定温差，蛋白极易降解，直接影响实验质量，所以避免反复冻融。代测放免标本的客户取材前须向我司销售人员索要说明书，具体操作注意事项请与我司技术人员沟通。
液体类标本：标本必须为液体，不含沉淀。包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。
血清：室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。
血浆：应根据试剂盒的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，加入10%（v/v）抗凝剂(0.1M柠檬酸钠或1%heparin 或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。
尿液、胸腹水、脑脊液：用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。
细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.0-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，缓冲液中可加入1μg/L蛋白酶抑制剂或50U/ml的Aprotinin（抑肽酶）。用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清置于-20度或-70度保存，如有必要，可以将样品浓缩干燥。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
三、寄标本时需注明以下情况：
1、标本编号；2、所测项目；3、是否做复孔；3、联系方式；4、实验后标本是否寄回。
客户须知：
客户应对所提供的材料及信息负责，如因客户提供的材料及信息不准确而引起的实验延误或经济损失由客户承担。
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